江户幕府时期，为制衡非亲藩的地方外样大名，德川幕府打算从西班牙购进2500支新式火枪。然而，装载这批火枪的御用船在海上遭到一伙身份不明的水军袭击，火枪被抢劫殆尽。幕府为此震怒，责令柳生十兵卫尽快破案，查明事情真相。十兵卫凭借武艺帐忍之卷，召集了全国各地的64名柳生门人齐聚江户，等待他们的，将是一场残酷的恶战。