自人类开始豢养宠物以来，猫和狗便是势不两立的死对头。人类不知道的是，狡猾的猫族一直野心勃勃，妄图霸占地球、统治人类。它们世代相传，研发高科技武器，卧底在人类身边，伺机发动政变。若不是忠心的狗族每次都在危急时刻挫败猫族的疯狂计划，人类恐怕早已沦为猫族的统治对象。因此，猫族对狗族恨之入骨，时刻想将其铲除。 一天，在布洛迪夫人家工作的侦探狗巴迪突然被绑架，下落不明。巴迪的任务艰巨且重要，因为它的主人布洛迪教授（杰夫·高布伦 饰）是研究人类抗狗过敏的科学家。一旦教授的研究成功，将会有更多的狗得到人类的喜爱。这对狗族来说是好事，但却是猫族不愿看到的。所以，以布奇（亚历克·鲍德温 配音）为首的三只守护在布洛迪教授家附近的忠犬断定，巴迪是被猫族绑架了。 巴迪被绑架一个月后，狗族为布洛迪教授家重新选派了一只侦探狗。小主人斯卡特（亚历山大·波洛克 饰）给这只狗取名为卢（托贝·马奎尔 配音）。卢初来乍到就遭到猫族的栽赃陷害，布奇也对这个新部下不太看好。然而，在猫族首领丁格（西恩·海耶斯 配音）策划的一次次窃取和破坏布洛迪最新配方的行动中，卢凭借自己的忠诚捍卫了荣誉。 后来，布洛迪一家在丁格的策划下被绑架。狗族在世界狗会议中心投票决定牺牲布洛迪一家，以保护刚研制成功的抗狗过敏配方。卢已和小主人斯卡特成为好朋友，尽管无法改变会议决定，它还是决定凭借一己之力从丁格手中救出主人一家。 卢潜入丁格的大本营梅森棉絮有限公司，此时丁格正集结部队准备向人类宣战。在布奇、沙姆、皮克的帮助下，卢不仅成功救出布洛迪一家，还再次彻底粉碎了猫族统治人类的野心。